Селенитовый бульон инструкция по применению

• Бульон селенита F, также известный как бульон селенита или бульон селенита-фекалий, представляет собой селективную обогатительную среду, используемую для выделения Сальмонелла видов из различных образцов, включая фекалии, мочу, воду, продукты питания и другие материалы, имеющие санитарное значение. Первоначально он был разработан Лейфсоном как эффективная среда для ингибирования колиформ и некоторых других микробных видов, таких как фекальные стрептококки, при одновременном стимулировании роста сальмонелл.
• В состав бульона с селенитом F входит лактозо-пептонный бульон в качестве буферного агента, а также добавлен биселенит натрия в качестве селективного агента. Триптон обеспечивает азотистые вещества для роста бактерий, а лактоза помогает поддерживать стабильный pH в среде. Присутствие селенита в бульоне служит селективным агентом, подавляющим рост колиформных бактерий и других конкурирующих бактерий. По мере роста сальмонеллы в среде они восстанавливают селенит и выделяют щелочь, что повышает pH и снижает ингибирующее действие селенита. Кислота, вырабатываемая лактозой брожение помогает поддерживать нейтральный pH и дополнительно поддерживает рост сальмонеллы.
• Целью использования бульона селенита F в качестве обогащенной среды является улучшение выявления сальмонеллы, особенно на неострых стадиях заболевания, когда организм может присутствовать в небольших количествах в кале. Он также полезен для эпидемиологических исследований и для выявления небольшого количества сальмонелл у бессимптомных пациентов или пациентов, находящихся в стадии выздоровления. После инкубации образца в бульоне с селенитом F в течение 12–18 часов при температуре 35–37°C проводят субкультивирование на селективной агаризованной среде, такой как агар с сульфитом висмута, агар с бриллиантовым зеленым или XLD-агар, для дальнейшего выделения и идентификации сальмонелл.
• В то время как бульон селенита F широко используется для обогащения и выделения сальмонелл, среда Раппапорта-Вассилиадиса (RV) в настоящее время рекомендуется в качестве альтернативы для селективного обогащения сальмонелл из пищевых продуктов и загрязненных сточными водами вод. Среда RV обеспечивает улучшенную селективность и чувствительность по сравнению с селенитовым бульоном или тетратионатным бульоном.
• Таким образом, бульон с селенитом F представляет собой селективную среду для обогащения, которая способствует выделению видов сальмонелл из различных образцов. Он ингибирует рост кишечной палочки и других конкурирующих бактерий, одновременно стимулируя рост сальмонелл, что позволяет проводить их последующую изоляцию на селективной агаровой среде.

Принцип бульона селенита F

Принцип бульона Selenite F основан на избирательном ингибирующем действии селенита и способности сальмонелл преодолевать это ингибирование. Компоненты среды работают вместе, создавая подходящую среду для роста сальмонелл, подавляя при этом рост других видов бактерий.

1. Азотистые вещества и соединения углерода. Ферментативный гидролизат казеина, присутствующий в среде, содержит азотистые вещества и соединения углерода, которые служат важными питательными веществами для роста бактерий.
2. Источник углеводов: лактоза включена в качестве источника углеводов в бульон Selenite F. Он играет роль в поддержании pH среды и обеспечивает субстрат для ферментации лактозы некоторыми бактериями.
3. Восстановление селенита: рост бактерий в среде приводит к восстановлению селенита, присутствующего в форме гидроселенита натрия (биселенита натрия). Это восстановление приводит к образованию щелочи, что увеличивает рН среды.
4. Ингибирование других бактерий: селенит известен своими ингибирующими свойствами в отношении многих видов грамположительных и грамотрицательных бактерий, включая энтерококки и кишечные палочки. Токсичность селенита снижается по мере увеличения pH среды, что способствует чрезмерному росту других бактерий.
5. Регулирование pH: Кислота, вырабатываемая бактериями в результате ферментации лактозы, помогает поддерживать нейтральный pH в среде. Фосфат натрия добавляется для дальнейшей стабилизации pH и снижения токсичности селенита.

Важно не инкубировать бульон дольше 24 часов, так как ингибирующее действие селенита снижается после 6-12 часов инкубации. Продолжительная инкубация может привести к избыточному росту нецелевых бактерий и повлиять на селективность среды.

Создавая селективную среду, способствующую росту сальмонелл, бульон Selenite F позволяет обогащать и затем выделять этот патоген из различных образцов.

Состав бульона селенита F

рН при 25°С 7.1 ± 0.2

Приготовление бульона селенита F.

Приготовление бульона селенита F включает следующие этапы:

1. Добавьте 4.0 г порошка селенита натрия в дистиллированную или деионизированную воду.
2. Добавьте оставшиеся 19.0 граммов порошка в раствор из предыдущего шага.
3. Доведите объем до 1.0 л, обеспечив тщательное перемешивание ингредиентов.
4. Осторожно нагрейте раствор и доведите его до кипения.
5. После закипания разлить бульон по стерильным пробиркам. Пробирки должны иметь глубину не менее 5 см, чтобы обеспечить достаточный объем среды.
6. Простерилизуйте пробирки с бульоном. Это можно сделать, поместив их в кипящую водяная баня или подвергнуть их воздействию свободного пара в течение 10 минут.
7. Важно отметить, что бульон с селенитом F нельзя автоклавировать, так как это может привести к изменению селективных свойств среды.
8. Дайте отвару остыть до комнатной температуры перед использованием.

Выполнение этих шагов обеспечивает надлежащее приготовление бульона с селенитом F, который затем можно использовать в качестве питательной среды для выделения сальмонелл и других соответствующих микроорганизмов из различных образцов.

Условия хранения и срок годности

Условия хранения и срок годности являются важными факторами для поддержания качества и эффективности обезвоженного и приготовленного бульона селенита F. Вот информация, основанная на предоставленном контенте:

Обезвоженная среда:

• Хранить обезвоженную среду при температуре 10-30°C.
• Крайне важно использовать среду до истечения срока годности, указанного на этикетке.
• Надлежащие условия хранения помогают сохранить целостность обезвоженной среды и обеспечить надежные результаты при ее восстановлении и использовании.

Подготовленная среда:

• Хранить приготовленный бульон селенита F следует при температуре 2-8°C.
• Держите среду вдали от света, чтобы предотвратить любые потенциальные изменения, вызванные светом.
• Приготовленную среду можно использовать до восемнадцати месяцев с даты приготовления при условии отсутствия видимых признаков загрязнения или порчи.
• Очень важно регулярно проверять среду на наличие любых изменений внешнего вида, таких как обесцвечивание, наличие частиц или другие отклонения. Если такие изменения происходят, среду не следует использовать.

Соблюдая соответствующие условия хранения как для обезвоженной, так и для готовой формы бульона селенита F, лаборатории могут обеспечить долговечность и качество среды. Соблюдение указанных температур хранения и мониторинг любых признаков загрязнения или порчи имеют решающее значение для получения точных и надежных результатов при использовании бульона с селенитом F для выделения и обнаружения сальмонеллы и других соответствующих микроорганизмов.

Инокуляция селенитового бульона

Процедура инокуляции селенитового бульона включает следующие этапы, как описано в предоставленном содержании:

1. Прививка:

• Возьмите приблизительно 1-2 грамма образца стула или других соответствующих образцов (примерно 10-15% объема бульона).
• Засейте пробирку с селенитовым бульоном образцом.
• Эмульгируйте бульон и образец вместе, чтобы обеспечить надлежащее перемешивание.

1. Инкубация:

• Инкубируйте пробирку с посевом селенитового бульона в окружающем воздухе при температуре 35-37°C.
• Инкубационный период должен составлять до 24 часов, так как более длительная инкубация может позволить колиформам перерасти патогены.

1. Субкультура:

• Через 12-18 часов инкубации перенесите часть селенитового бульона на селективные и дифференциальные кишечные питательные среды, такие как XLD (Ксилоза лизин дезоксихолат) или HE Agar (Hektoen Enteric Agar).
• Перенесите субкультуру на среду, чтобы изолировать отдельные колонии.

1. Инкубация культуральных чашек:

• Инкубируйте культуральные чашки на воздухе при температуре 35-37°С.
• Чашки следует инкубировать в течение 18-24 часов.

1. Морфология колонии:

• После инкубационного периода осмотрите чашки с культурами на наличие типичной морфологии колоний.
• Обратите внимание, что конкретная морфология колонии может варьироваться в зависимости от типа используемой среды.

Важная заметка:

• Селенитовый бульон не следует использовать в качестве единственной среды для выделения сальмонелл.
• Рекомендуется использовать селенитовый бульон в сочетании с селективными и неселективными средами для посева, чтобы увеличить вероятность выделения патогенов, особенно когда они могут присутствовать в небольшом количестве.

Следуя этой процедуре инокуляции, лаборатории могут повысить шансы обнаружения и выделения сальмонеллы и других соответствующих микроорганизмов из различных типов образцов. Сочетание селенитового бульона с селективными и дифференциальными средами повышает вероятность выделения патогенов при одновременном снижении чрезмерного роста колиформных бактерий.

Интерпретация результатов на бульоне с селенитом F

Интерпретация результатов на бульоне с селенитом F включает наблюдение за ростом организмов в среде и их последующее пересев на среду. МакКонки Агар. Вот интерпретация, основанная на предоставленной информации:

1. Положительный результат:

• На рост микроорганизмов в бульоне селенита F указывает помутнение среды.
• При пересеве на агар Мак-Конки после инкубации при 35-37°С в течение 18-24 часов положительные результаты характеризуются бесцветными колониями и хорошим ростом.
• Примеры организмов, которые могут дать положительные результаты, включают Salmonella Typhimurium, Shigella sonnei, Salmonella enteritidis и другие.

1. Отрицательный результат:

• Отрицательные результаты характеризуются розовыми колониями с желчным осадком или отсутствием роста на агаре МакКонки.
• Ингибирование или отсутствие роста на агаре МакКонки указывает на отсутствие целевых микроорганизмов.
• Примеры микроорганизмов, которые могут дать отрицательный результат, включают Escherichia coli, Enterococcus faecalis и другие.

Интерпретация результатов бульона с селенитом F помогает определить наличие или отсутствие сальмонеллы и других соответствующих микроорганизмов в тестируемом образце. Положительные результаты указывают на рост целевых организмов, а отрицательные результаты указывают на отсутствие этих организмов. Для точной идентификации и дифференциации конкретных видов бактерий могут потребоваться дополнительные подтверждающие тесты и методы идентификации.

Использование бульона селенита F

Бульон Selenite F имеет несколько применений в микробиологии, как указано в предоставленном содержании:

1. Селективное обогащение для Salmonella spp.:

• Бульон Selenite F в основном используется в качестве селективной питательной среды для культивирования видов сальмонелл.
• Бульон содержит селенит натрия, который подавляет рост некоторых бактерий и способствует росту сальмонеллы.
• Он обеспечивает благоприятную среду для выделения и обогащения сальмонелл из различных образцов, таких как фекалии, моча, вода и образцы продуктов питания.

1. Среда обогащения для шигелл:

• Бульон с селенитом F также можно использовать в качестве питательной среды для выделения определенных видов шигелл.
• Подобно его использованию для сальмонеллы, бульон помогает в восстановлении и обогащении шигелл из клинических образцов и других источников.

1. Транспортная среда для Vibrio cholerae:

• Бульон Selenite F рекомендуется для транспортировки штаммов Vibrio cholerae.
• Организмы Vibrio cholerae могут выживать в натриево-селенитовом бульоне от 2 до 5 дней, что позволяет транспортировать их в лабораторию для дальнейшего анализа и идентификации.

В целом бульон Selenite F является важным инструментом в микробиологической лаборатории для селективного обогащения и выделения видов Salmonella и Shigella. Он также служит транспортной средой для Vibrio cholerae, обеспечивая жизнеспособность организмов во время транзита.

Ограничения бульона селенита F

Бульон Selenite F имеет определенные ограничения, которые следует учитывать, как указано в предоставленном содержании:

1. Токсичность гидроселенита натрия:

• Гидроселенит натрия, селективный агент в бульоне селенита F, является очень токсичным и коррозионно-активным агентом.
• Важно обращаться с ним с большой осторожностью и соблюдать надлежащие меры предосторожности при работе с бульоном.
• При попадании на кожу необходимо немедленное и тщательное промывание большим количеством воды.

1. Обогащающий бульон как единственная среда для выделения:

• Бульон Selenite F не следует использовать в качестве единственной среды для выделения и выделения патогенов.
• Он разработан как среда для обогащения и должен использоваться в сочетании с селективными и неселективными средами для посева.
• Использование дополнительных сред повышает вероятность выделения возбудителей, особенно когда они могут присутствовать в небольшом количестве.

1. Пищевая вариация:

• Из-за различий в пищевых потребностях различных штаммов бактерий некоторые штаммы могут плохо расти или вообще не расти на бульоне с селенитом F.
• Важно учитывать это ограничение и использовать альтернативные среды для обогащения или выделения, если для определенных штаммов наблюдается плохой рост или отсутствие роста.

Эти ограничения следует учитывать при работе с бульоном Selenite F, чтобы обеспечить точные и надежные результаты при обнаружении и выделении сальмонелл, шигелл и других соответствующих микроорганизмов. Соблюдение мер предосторожности, использование дополнительных сред и учет вариантов питания могут помочь преодолеть эти ограничения и повысить эффективность бульона.

FAQ

Рекомендации

• http://exodocientifica.com.br/_technical-data/M052.pdf
• https://microbeonline.com/selenite-broth-composition-uses/
• https://legacy.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/US/L007497(09)(0207).pdf

Мы надеемся, что вам понравилось читать нашу последнюю статью в блоге! Мы очень рады видеть положительный отклик, который он получает до сих пор. Мы понимаем, что иногда после просмотра интересного контента у вас могут возникнуть вопросы или вы захотите углубиться в тему.

Для облегчения содержательных дискуссий и поощрения обмена знаниями мы создали специальную страницу форума QNA, связанную с этой конкретной статьей. Если у вас есть какие-либо вопросы, комментарии или мысли, которыми вы хотели бы поделиться, мы приглашаем вас посетить форум QNA.

Страница форума QNA

Не стесняйтесь задавать свои вопросы или участвовать в текущих дискуссиях. Наша команда экспертов, а также другие читатели будут активно участвовать в форуме, чтобы взаимодействовать с вами и давать проницательные ответы. Помните, что обмен своими мыслями не только помогает вам глубже понять, но также способствует росту и обучению сообщества. Мы надеемся услышать от вас и способствовать обогащающей дискуссии. Спасибо за участие в нашем путешествии!